生物化學與分子生物學是從分子水平研究生命本質的一門學科,是生命科學的前沿學科,掌握其基本理論及實驗已成為探討疾病的分子機制和防治方法,甚至認識生命現象的必要手段。《生物化學與分子生物學實驗教程》包括三章,第一章是實驗室規章制度和實驗記錄、實驗報告,第二章介紹了實驗室常用儀器設備、常用試劑及常用實驗技術,第三章為具體實驗內容,分為基礎性實驗、融合性實驗和創新性實驗三大類:基礎性實驗注重培養學生基本的實驗操作能力,使其熟悉生物化學與分子生物學常見的實驗方法和手段;融合性實驗主要結合學科的不同特色,培養學生綜合分析和解決問題的能力;創新性實驗主要根據學科的新發展,啟發學生開拓思路,并提出解決問題的方案,重點培養學生的獨立思考和創新能力。
《生物化學與分子生物學實驗教程》適合醫學院校學生使用,也可作為生物化學與分子生物學相關研究人員的參考用書。
高等院校教育改革如火如荼,尤其是對創新創業能力的提升有了新的要求。實驗教學是創新型人才培養的重要環節。各個院校的實驗教學有各自的特點,目前普遍傾向于實驗課程獨立開課,逐步擺脫實驗課程完全依賴于理論教學的傳統模式。院校間的相互學習和交流也是非常必要的。在上述背景下,編者聯合了四川大學華西基礎醫學與法醫學院、西南醫科大學基礎醫學院及昆明醫科大學基礎醫學院的多位長期堅守在生物化學與分子生物學理論和實驗教學一線的老師(主要是年輕教師),共同編寫了本教材。
本教材在內容編寫方面,除包括了原有的生物化學與分子生物學課程的主要基礎性實驗外,還設計了一些融合性實驗和創新性實驗,目的是讓學生通過實驗掌握較全面的實驗技能,同時能夠將各學科的知識貫通起來。此外,從多個角度分層次地展現教學內容,使教學形式活潑生動,教學內容形象直觀,學生容易理解相關知識,進而調動學生學習的積極性和主動性,激發學生的創造性思維。這是我們所做出的努力和嘗試,希望能取得一定的效果。編者的最終目的是把生物化學與分子生物學實驗教學工作做好,努力為培養適應社會發展需要的人才盡綿薄之力。
教材的編寫,實際上是給了編者一次機會,以吸取前人的精華.總結實驗教學中的經驗教訓,改正不足。但由于編者水平有限,書中難免存在不足之處,懇請廣大讀者及同行學者提出寶貴意見,以便及時修正,不勝感激。
前言
第一章 實驗室規章制度和實驗記錄、實驗報告
一、實驗室規章制度
二、實驗室安全及防護
三、實驗記錄和實驗報告
(一)實驗記錄
(二)實驗報告
四、生物化學與分子生物學實驗的繪圖要求、方法及實驗數據處理分析方法
(一)實驗報告中的圖表
(二)實驗數據的處理與分析
第二章 實驗室常用儀器設備、常用試劑及常用實驗技術
一、實驗室常用玻璃儀器的介紹
(一)常用玻璃儀器
(二)常用玻璃儀器的洗滌
二、常用試劑的配制、緩沖溶液與緩沖體系的介紹
(一)常用試劑配制要點
(二)實驗試劑的使用
(三)溶液濃度
(四)緩沖溶液
三、離心技術
(一)離心中常用概念
(二)離心方法
(三)離心機的構造
(四)離心機的分類
(五)離心機使用注意事項
四、分光光度技術
(一)原理
(二)分光光度計的基本結構
(三)分光光度計的應用
(四)分光光度計的常用類型
(五)分光光度計的使用
五、層析技術
(一)層析原理
(二)層析分類
(三)主要的層析技術
六、電泳技術
(一)電泳的基本原理
(二)影響電泳的因素
(三)電泳的分類
(四)常用的電泳技術
七、PCR技術
(一)PCR技術的基本原理
(二)PCR技術操作要素
(三)PCR技術所需儀器設備
(四)各種PCR技術的變體
八、細胞培養技術
(一)設施器材及培養基
(二)細胞培養常規操作
(三)細胞培養具體流程
(四)注意事項
(五)細胞培養方式
(六)細胞培養存在的不足
九、其他常規儀器設備的使用
(一)移液器
(二)酶標儀
(三)水浴鍋
第三章 實驗項目
第一節 基礎性實驗項目
一、蛋白質定量分析實驗
實驗一 考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質含量
實驗二 BcA法測定蛋白質含量
實驗三 Folin-酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質含量
實驗四 紫外分光光度法測定蛋白質含量
二、層析分離純化實驗
實驗五 血清γ-球蛋白的分離純化與鑒定
實驗六 血清脂質的薄層層析
三、電泳實驗
實驗七 血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳及定量分析
實驗八 心、肝、腎組織乳酸脫氫酶同工酶的電泳分離
實驗九 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白
實驗十 SDS—PAGE測定蛋白質相對分子質量
四、酶學實驗
實驗十一 堿性磷酸酶的分離、純化與比活性測定
實驗十二 酶促反應動力學實驗
實驗十三 MMP-2和MMP-9表達的明膠酶潛分析
五、物質代謝實驗
實驗十四 胰島素和腎上腺素對血糖濃度的影響
實驗十五 肝糖原的提取與鑒定
六、分子生物學實驗
實驗十六 組織細胞基因組DNA的提取
實驗十七 質粒DNA的提取、定量、電泳與酶切鑒定
實驗十八 核酸含量的測定
實驗十九 PCR擴增目的基因
實驗二十 DNA瓊脂糖凝膠電泳及限制性內切核酸酶酶譜分析
第二節 融合性實驗項目
一、免疫生化技術
實驗二十一 凝集反應
實驗二十二 沉淀反應
實驗二十三 免疫擴散和免疫電泳
實驗二十四 酶聯免疫吸附實驗
實驗二十五 免疫膠體金實驗
二、分子生物學、細胞生物學、生物化學整合實驗
實驗二十六 培養細胞或組織總RNA的提取及RT-PCR擴增目的基因
實驗二十七 培養細胞綠色熒光蛋白基因轉染及熒光顯微鏡檢測表達效率
實驗二十八 蛋白質印跡(Westernblot)實驗
第三節 創新性實驗項目
實驗二十九 基因克隆與重組表達質粒的構建
實驗三十 基因重組表達質粒在原核細胞中的表達、純化與鑒定
實驗三十一 基因重組表達質粒在真核細胞中的表達與檢測
實驗三十二 免疫酶組織(細胞)化學技術
實驗三十三 免疫熒光細胞化學技術
參考文獻
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