《顯微形態學實驗（組織學與胚胎學分冊）（第2版）》共分三篇。第一篇為常用儀器及基本實驗技術，主要介紹形態學常用的顯微鏡的構造和使用，常用實驗方法的原理、操作步驟及注意事項；第二篇為驗證性實驗，為傳統形態學實驗部分，主要描述細胞、組織、器官的正常形態結構及胚胎發生過程；第三篇為綜合創新性實驗，主要介紹了一些組織學與胚胎學研究方法的基本原理、實驗步驟和應用。
目錄
第一篇常用儀器及基本實驗技術
第一章光學顯微鏡的結構和使用（1）
第二章組織切片制作（10）
第三章組織切片常用染色方法（13）
第四章免疫組織化學技術（14）
第五章組織細胞培養技術（21）
第六章常用電鏡技術（25）
第二篇驗證性實驗
第一章組織學緒論（30）
第二章上皮組織（33）
第三章結締組織（39
第四章血液與血細胞發生（44）
第五章軟骨組織和骨組織（48
第六章肌組織（53）
第七章神經組織（58）
第八章神經系統（64）
第九章眼和耳（67）
第十章循環系統（75）
第十一章皮膚（80）
第十二章免疫系統（84）
第十三章內分泌系統（90）
第十四章消化管（95）
第十五章消化腺（103）
第十六章呼吸系統（110）
第十七章泌尿系統（114）
第十八章男性生殖系統（119）
第十九章女性生殖系統（123）
第二十章胚胎學緒論（130）
第二十一章胚胎發生總論（131）
第二十二章顏面的發生（142）
第二十三章消化系統和呼吸系統的發生（144）
第二十四章泌尿系統和生殖系統的發生（148）
第二十五章心血管系統的發生（153）
第二十六章神經系統、眼和耳的發生（162）
第三篇綜合創新性實驗
第一章快速疏松結締組織鋪片的制作（166）
第二章顯示脂肪的染色法（167）
第三章白細胞分類計數（170）
第四章胰島中3種主要內分泌細胞的鑒別（172）
第五章PAS染色法顯示肝糖原（174）
第六章生精細胞凋亡的檢測（175）
第七章鼠胚胎標本的制作（177）
第八章骨髓基質干細胞的分離和培養（179）
第九章精液常規檢查（180）
附錄Ⅰ《組織學與胚胎學》實驗教學大綱（183）
附錄Ⅱ《組織學與胚胎學》課程考試大綱（199）
查看全部↓
第一篇 常用儀器及基本實驗技術
本篇主要介紹顯微形態學實驗的常用儀器和基本實驗方法，包括多種顯微鏡的構造和使用方法，常用切片制作技術和染色方法，免疫組化、組織細胞培養技術及常用電鏡技術等。
第一章 光學顯微鏡的結構和使用
一、普通光學顯微鏡的結構和使用
1. 成像原理與構造 光學顯微鏡利用凸透鏡放大成像原理，將肉眼不能分辨的微小物體通過物鏡、目鏡兩次放大成像，便于人們提取觀察對象的微細結構信息。普通光學顯微鏡由機械裝置和光學系統兩部分構成（圖1-1-1）。
圖1-1-1 普通光學顯微鏡結構示意圖
（1）機械裝置
1）鏡座：位于顯微鏡底部，支持全鏡。
2）鏡柱：下端連鏡座，上端與鏡臂相連。
3）鏡臂：呈弓形，位于鏡柱上方，支持鏡筒，是取用顯微鏡時握拿的部位。
4）鏡筒：位于鏡臂的前面，上端裝有目鏡，下端連旋轉盤。根據鏡筒的數目，顯微鏡可分為單目鏡和雙目鏡兩類。
5）旋轉盤：又稱物鏡轉換器，為接于鏡筒下方的圓盤，其上嵌有3～4個物鏡，旋轉物鏡轉換器，可調換不同放大倍數的物鏡。
6）載物臺：四方形或圓形平臺，供放置載玻片或標本之用，中央有一通光孔。
7）片夾：載物臺上用于固定載玻片或標本的鐮刀形彈簧夾，其左邊可以向外拉開。片夾常被固定在推片器的推進齒條上。
8）推片器：是移動標本的機械裝置，由一橫一縱兩個推進齒輪和齒條構成，調節推片器的旋鈕位于載物臺一側的下方，轉動旋鈕可以使載玻片前后左右移動。
9）調焦螺旋：粗調焦螺旋與細調焦螺旋合在一起，位于鏡臂上端或鏡柱兩側，轉動調焦螺旋可上下移動載物臺，從而調節焦距使之清晰成像。粗調焦螺旋（大螺旋）可使鏡筒或載物臺按垂直方向做較大距離的升降，用于低倍鏡觀察時的焦距調節。細調焦螺旋（小螺旋）可使鏡筒或載物臺做很小距離的升降，適用于高倍鏡和油鏡觀察時的清晰成像，其構造精密，不宜旋轉過多、過快。
（2）光學系統
1）目鏡：裝于鏡筒上端，由兩塊透鏡組成。亦分高倍與低倍兩種。高倍者較短，其上刻有10×或15×；低倍者較長，其上刻有5×或8×字樣。目鏡內常裝有指針，用以指示視野中的某一目標供他人觀察。
2）物鏡：裝于旋轉盤上，一般有低倍物鏡、高倍物鏡及油鏡三種。低倍鏡短，其上刻有10/0.25字樣，10代表該物鏡的放大倍數，0.25表示數值孔徑，物鏡的分辨率及放大倍數與數值孔徑成正比。標本的放大主要由物鏡完成，物鏡放大倍數越大，它的焦距越短，物鏡與玻片間的距離越小。高倍鏡與油鏡較長，其上分別刻有40/0.65及100/1. 25等字樣（圖1-1-2）。當物像清晰時，物鏡鏡面與蓋玻片上表面之間的距離稱工作距離。物鏡的放大倍數與其工作距離成反比（圖1-1-2）。當低倍鏡被調節到工作距離后，可直接轉換高倍鏡或油鏡，稍微調節細調焦螺旋便可見到清晰的物像，這種情況稱為同高調焦。
光鏡的放大率等于目鏡和物鏡放大倍數的乘積。
圖1-1-2 普通光學顯微鏡物鏡及其工作距離示意圖
3）聚光器與虹彩光圈：聚光器位于載物臺通光孔下方，由一組透鏡組成，能將反光鏡所反射之光線或照明燈泡之光線匯聚至所觀察的標本。載物臺下方有一小螺旋，轉動時可升降聚光器。上升時光線強，下降時光線弱。虹彩光圈位于聚光器下方，由多個活動鋼片組成，中心形成圓孔，其外側有一小手柄，撥動時能調節光圈大小，以調節光線的強弱。
4）光源：反光鏡或照明燈泡。反光鏡位于鏡座上方，能向各方轉動，使光線反射至聚光器；照明燈泡通常安裝在鏡座內，其附近有電源開關及光線強弱調節旋鈕。
2. 使用方法
（1）對光：將低倍鏡轉到對準通光孔的位置，上升聚光器，打開光圈，打開電源開關后轉動光線強弱調節旋鈕或調整反光鏡的角度，若用雙目鏡觀察標本，應用雙眼自目鏡中觀察，調至整個視野非常明亮為止，同時調節兩個目鏡間的距離，直到雙眼看到一共同視野為止。用單目鏡觀察標本時，應練習兩眼同時睜開，以減少視覺疲勞；用左眼自目鏡中觀察，右眼用于繪圖和記錄實驗結果。
（2）置片：將組織切片有蓋玻片的一面朝上，置于載物臺上，將片夾左邊向外拉開，把標本玻片平移入片夾內，輕輕彈回片夾左邊，卡住固定好標本，轉動推片器調節旋鈕，將觀察目標移至通光孔中央。
（3）調節焦距：切片放好后，先慢慢轉動粗調焦螺旋使載物臺上升，同時雙眼從側面注視切片與物鏡間距離，當物鏡鏡頭與切片相距約0.5cm時，眼睛從目鏡中觀察，邊觀察邊將載物臺慢慢下降，直到物像清晰為止。若物像不夠清晰，可用細調焦螺旋調節。
（4）低倍物鏡轉高倍物鏡：低倍鏡看清物像后，將要觀察的目標移至視野中央，直接轉動物鏡轉換器由低倍鏡轉至高倍鏡。轉至高倍鏡后，一般即可見模糊的物像，注意此時千萬不要轉動粗調焦螺旋及提升載物臺，只需用細調焦螺旋稍加調整即可見清晰的物像。
（5）油鏡的用法：使用油鏡時，應先在高倍鏡下看清物像，并將要觀察的目標移至視野中央，移開高倍鏡，在通光孔位置的標本上滴一小滴香柏油后，轉動物鏡轉換器至油鏡對準通光孔。從側面觀察，可見油鏡頭下端與切片上的鏡油充分接觸。此時目鏡內觀察一般也可見模糊的物像，緩慢轉動細調焦螺旋直至看到清晰物像。
油鏡用完后，先轉動粗調焦螺旋下降載物臺并將油鏡轉離通光孔，用干擦鏡紙揩擦鏡頭一次，以去除大部分的油，再用沾有少許清洗劑的擦鏡紙緩慢、仔細擦拭一次，以將油徹底去除，最后用干擦鏡紙再擦拭一次，以將清洗劑去除。切片的處理方法與油鏡頭相似。
3. 使用注意事項 顯微鏡是精密的光學儀器，若使用不當，常會造成巨大損失，故要求同學們在使用時必須嚴格遵守下列規定：
（1）使用結束后，先將光調節器調至最小，關閉電源。
（2）搬動顯微鏡時必須雙手持鏡，以右手握緊鏡臂，左手托住鏡座，平貼胸前，以防撞碰。禁止單手提鏡或使鏡倒轉，以免零件落地打破。
（3）使用前應檢查顯微鏡的主要部件有無缺損；使用時應正確、緩慢的旋動有關機械部分。
（4）如遇鏡頭模糊不清時，嚴禁用手或粗布、粗紙等拭擦鏡頭，只能用擦鏡紙輕輕拭擦。
（5）更換切片標本時，應先轉開物鏡，再取出或放置切片標本。
（6）使用油鏡時，應首先鑒別高倍鏡和油鏡這兩種鏡頭，切勿將油鏡當高倍鏡使用。
（7）不要隨便取出目鏡，以免灰塵落入鏡筒內影響觀察。
（8）不得自行拆卸修理顯微鏡，如有故障應立即報告老師。
（9）顯微鏡用完后，應將鏡頭轉在交叉位置移離通光孔，載物臺降到最低位置，降下聚光器，蓋好防塵罩放回原處。
二、倒置相差顯微鏡的結構和使用
1. 成像原理與構造 普通光學顯微鏡一般不能分辨未染色細胞的細微結構，這是因為各細微結構的折光性接近或對比度不夠。倒置相差顯微鏡，是相差顯微鏡和倒置顯微鏡相結合的產物，倒置相差顯微鏡既具有倒置顯微鏡的倒置觀察方式，同時又具有與相差顯微鏡相一致的成像原理（圖1-1-3）。
倒置顯微鏡組成和普通顯微鏡一樣，主要包括三部分：機械部分、照明部分、光學部分。相比于普通顯微鏡，倒置顯微鏡的物鏡與照明聚光系統以載物臺為軸顛倒位置，物鏡在載物臺之下，照明系統在載物臺之上。這樣的構造使得照明聚光系統與載物臺的有效距離可以顯著擴大，便于放置培養皿、細胞培養瓶等較厚的待觀察器具，而同時物鏡與材料之間的工作距離不必很大。一般研究用倒置顯微鏡都配有4×、10×、20×、40×相差物鏡。
相差顯微鏡和普通顯微鏡的主要區別是用環狀光闌代替可變光闌，用帶相板的相差物鏡（相板能將直射光和衍射光的相位差轉變為振幅差，使明暗反差加強）代替普通物鏡，并帶有一個合軸用的望遠鏡。活細胞和未染色生物標本各部分細微結構的折射率和厚度不同，光波通過時，波長和振幅并不發生變化，僅發生人眼無法觀察的相位變化（光程差）。相差顯微鏡通過帶有環狀光闌的聚光鏡和相差物鏡改變這種相位差，把相位差變為振幅（光強度）差從而實現觀測。
相差顯微鏡主要用于觀察生長在培養瓶中的活細胞或未染色的組織切片，有時也可用于觀察缺少反差的染色標本。
2. 使用方法
（1）開機：打開鏡體下端的電源開關。
（2）調節光源：旋轉物鏡轉換器，選擇放大倍數較小的物鏡，同時調節鏡體下端的光線亮度螺旋，并通過調節聚光鏡下面的光闌來調節光源的大小。
（3）調節焦距：將待觀察對象置于載物臺上，慢慢轉動粗調焦螺旋使物鏡升降，見到物像后再用細調焦螺旋調至物像清晰，并消除或減小圖像周圍的光暈，提高圖像的襯度。調節焦距可看到不同焦距水平的細胞。隨后移動載物臺上的觀察對象，選擇觀察視野并拍照或利用與顯微鏡連接的計算機采集數碼圖像。根據需要可轉換至高倍鏡觀察。
（4）關機：取下觀察對象，旋轉光源亮度螺旋至最暗。關閉鏡體下端的電源開關，并旋轉物鏡轉換器，使物鏡置于載物臺下，防止灰塵沉降其上。
3. 使用注意事項 與普通光學顯微鏡基本相同。
三、熒光顯微鏡的結構和使用
1.成像原理與構造 熒光顯微鏡（fluor-escence microscope）也是光學顯微鏡的一種，由普通光學顯微鏡加上一些附件（如熒光光源、熒光鏡組件）組成，結構如圖1-1-4所示。熒光顯微鏡的原理是利用高效發光光源，經過慮色系統發出一定波長的光作為激發光，激發檢測樣品內的熒光物質發射出各種不同顏色的熒光后，再經物鏡和目鏡進行放大以觀察標本的熒光圖像。熒光顯微鏡主要用于細胞結構、功能及化學成分等的研究。
熒光顯微鏡由光源、濾色系統和光學系統等主要部件組成（圖1-1-4）。光源一般采用超高壓汞燈，該燈可發出各種波長的光，每種熒光物質都有一個產生最強熒光的激發光波長，所以需加用濾色系統僅使一定波長的激發光經物鏡照射至標本上。濾色系統是熒光顯微鏡的重要部位，由激發濾板和壓制濾板組成。根據光源和熒光色素的特點，可選用紫外、紫色、藍色或綠色激發濾板，分別提供一定波長范圍的激發光。壓制濾板與激發濾板相對應，其作用是完全阻擋激發光進入目鏡，以免干擾熒光和損傷眼睛，同時讓特異波長范圍的熒光選擇透過，以顯示專一的熒光色彩。故壓制濾板與激發濾板必須選擇配合使用。
熒光顯微鏡按照明方式可分為落射式和透射式兩類。落射式熒光顯微鏡是近代發展起來的新式熒光顯微鏡，透射式熒光顯微鏡較為原始，其激發光源是通過聚光鏡穿過標本材料來激發熒光的。目前熒光顯微鏡照明方式通常為落射式，其成像原理是激發光通過雙色束分離器反射至物鏡，向下落射到標本表面，樣品所產生的熒光以及由物鏡表面、蓋玻片表面反射的激發光同時進入物鏡，返回到雙色束分離器，使激發光和熒光分開，殘余激發光被壓制濾板吸收，因此物鏡同時具有照明聚光器和收集熒光的作用（圖1-1-5）。
2. 使用方法
（1）開機：打開紫外燈電源，超高壓汞燈要預熱15min才能達到最亮點。
（2）選擇相應的濾色系統：透射式熒光顯微鏡需在光源與暗視野聚光器之間裝上所要求的激發濾板，在物鏡的后面裝上相應的壓制濾板。落射式熒光顯微鏡需根據樣品的熒光指示劑，在光路的插槽中插入所要求的激發濾板、雙色束分離器、壓制濾板的插塊即旋轉熒光組件室數碼圓盤，以滿足不同熒光反應產物的需要，分別對應如下：
WB——適用于FITC熒光抗體染色的樣品觀察，陽性染色為綠色。
WG——適用PE或Cy3熒光抗體和羅丹明染色的樣品觀察，陽性染色為紅色。
WU——適用于紫外光熒光染色的樣品觀察，陽性染色為藍色。
（3）調節光源：將熒光指示劑標記好的樣品放存載物臺后，低倍鏡對準通光孔，根據不同型號熒光顯微鏡的調節裝置，調整光源中心，使其位于整個照明光斑的中央。
（4）調焦距：按照普通光學顯微鏡的使用方法調焦距至物像清晰為止。根據需要可轉換至高倍鏡或油鏡觀察。同時利用與顯微鏡連接的計算機采集數碼圖像。
3. 注意事項
（1）嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序。
（2）應在暗室中進行檢查。進入暗室后，接上電源，點燃超高壓汞燈5
查看全部↓
新書資訊