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本書通過預針刺不同配穴及腹部推拿，研究其對應激性大鼠胃黏膜形態的影響和對血清及胃組織中氧化-抗氧化與炎癥相關因子的影響，以及對胃組織TLRs信號通路及大腸組織TLRs信號通路相關mRNA的影響，從多角度分析不同配穴預針刺及腹部推拿對應激性胃潰瘍大鼠黏膜組織的保護作用。本書探討了預針刺不同配穴及腹部推拿對保護黏膜組織作用上的效應差異，以期對腧穴配伍理論及腹部推拿提供實驗依據。

通化師范學院醫藥學院講師，醫學博士。中國針灸學會臨床分會理事，世界中醫藥學會聯合會痧療罐療專業委員會理事，吉林省針灸學會理事。多年來一直從事氧化-抗氧化相關疾病的研究工作，作為項目負責人主持承擔吉林省科技廳，吉林省教育廳、吉林省中醫藥管理局項目各1項。參與國家自然科學基金項目2項。迄今已發表文章20多篇，其中SCI收錄論文5篇，中文核心收錄論文3篇。作為主要編者編著《圖說中醫文化》《灸法醫鑒》《百病一針靈》等書籍。

第1部分預針刺不同配穴對SGU大鼠模型胃組織的影響

1預針刺不同配穴對SGU大鼠胃黏膜的形態學影響2

1．1實驗材料2

1．1．1實驗動物及分組2

1．1．2主要儀器及試劑2

1．2實驗方法3

1．2．1實驗動物分組及干預方法3

1．2．2造模方法4

1．2．3觀察指標及檢測方法5

1．2．4統計分析6

1．3實驗結果7

1．3．1各組大鼠胃組織大體形態比較7

1．3．2各組大鼠胃潰瘍組織形態學比較7

1．4小結8

1．5討論9

1．5．1胃潰瘍的現代及中醫的認識9

1．5．2水浸束縛應激性胃潰瘍動物模型的發展變化24

1．5．3論合募配穴和俞募配穴25

1．5．4合募配穴和俞募配穴防治應激性胃潰瘍的效應

規律分析26

2預針刺不同配穴對SGU大鼠血清及胃組織氧化因子及炎性因子的

影響28

2．1實驗材料28

2．1．1實驗動物及分組28

2．1．2主要儀器與試劑28

2．2實驗方法29

2．2．1TBA法測定血清SOD水平29

2．2．2TBA法測定血清MDA水平29

2．2．3比色法測定血清及胃組織MPO水平29

2．2．4硝酸還原酶法測定血清及胃組織NO水平29

2．2．5比色法測定胃組織GSH-Px水平30

2．2．6ELISA法檢測血清IL-1β #65380;TNF-α和IL-6 #65380;ET-1水平30

2．2．7統計分析30

2．3實驗結果30

2．3．1各組大鼠胃組織中氧化-抗氧化因子的水平30

2．3．2各組大鼠血清中氧化-抗氧化因子的水平31

2．3．3各組大鼠血清中炎癥細胞因子的含量31

2．4小結32

2．5討論33

2．5．1氧化-抗氧化因子系統對黏膜組織的影響33

2．5．2炎癥細胞因子對黏膜組織的影響35

2．5．3針刺對氧化應激的影響研究概況及發展趨勢35

3預針刺不同配穴對SGU大鼠胃組織TLRs信號通路的影響38

3．1實驗材料38

3．1．1實驗動物及分組38

3．1．2主要儀器與試劑38

3．2實驗方法40

3．2．1干預方法40

3．2．2造模方法40

3．2．3免疫組化染色法觀察胃組織TLR4 #65380;MyD88 #65380;TRIF蛋白

表達情況40

3．2．4Westen

lot法檢測胃組織中TLR4 #65380;MyD88 #65380;IκB-α

蛋白的表達41

3．2．5統計分析41

3．3實驗結果42

3．3．1各組大鼠胃組織的TLR4 #65380;MyD88 #65380;TRIF免疫組化結果42

3．3．2各組大鼠胃組織的TLR4 #65380;MyD88 #65380;IκB-α蛋白免疫印跡結果43

3．4小結44

3．5討論45

3．5．1TLRs信號通路對黏膜組織的影響45

3．5．2針刺對TLRs信號通路的影響46

3．5．3炎癥 #65380;氧化應激與TLRs信號通路的關系49

3．5．4TLRs信號通路對“氧化-抗氧化”平衡的影響49

3．5．5不同配穴針刺治療胃潰瘍機制的研究進展54

3．5．6預針刺對保護黏膜組織的“調衡防控”分子機制59

3．5．7不同配穴組方與功效的探討60

第2部分預針刺不同配穴對SGU大鼠大腸組織TLRs信號通路mRNA的影響

4預針刺不同配穴對SGU大鼠大腸組織TLRs信號通路mRNA的影響64

4．1實驗材料64

4．1．1實驗動物及分組64

4．1．2主要儀器及試劑64

4．2實驗方法65

4．2．1干預方法65

4．2．2造模方法65

4．2．3樣本采集與大腸組織RNA提取65

4．2．4總RNA質量檢測66

4．2．5分析純化mRNA及片段化66

4．2．6合成第一鏈cDNA66

4．2．7合成第二鏈cDNA66

4．2．8雙鏈cDNA末端修復反應66

4．2．93′末端加“A”反應67

4．2．10連接測序接頭67

4．2．11文庫片段篩選67

4．2．12PCR擴增DNA文庫67

4．2．13文庫的質量檢測67

4．2．14上機測序68

4．3實驗過程68

4．3．1采用FastQC測序數據，對原始數據質量評估68

4．3．2采用Timgaloe測序數據質量控制68

4．3．3采用HISAT2參考基因組比對68

4．3．4采用Rseqc對轉錄組整體質量評估68

4．3．5采用StingTie進行基因表達定量69

4．3．6采用deseq2進行差異基因鑒定69

4．4實驗結果70

4．4．1mRNA質量質控結果70

4．4．2mRNA數據質控結果71

4．4．3各組mRNA差異表達比較72

4．4．4各組樣品TLRs信號通路差異基因的GO富集比較73

4．4．5各組樣品TLRs信號通路差異基因的KEGG富集分析74

4．5小結75

4．6討論76

4．6．1胃和大腸在消化系統胚胎發育上是同源的76

4．6．2胃和大腸在中醫臟腑關系中聯系緊密76

4．6．3合募配穴組與俞募配穴組對應激性胃潰瘍大鼠黏膜的保護的共同基因77

4．6．4合募配穴組對應激性胃潰瘍大鼠黏膜的保護作用的基因77

4．6．5俞募配穴組對應激性胃潰瘍大鼠黏膜的保護作用的基因77

第3部分預針刺與奧美拉唑對SGU模型大鼠胃組織保護作用研究

5預針刺合募配穴預防應激性胃潰瘍模型大鼠胃組織保護作用的機制研究82

5．1實驗材料82

5．1．1實驗動物及分組82

5．1．2主要儀器及試劑82

5．2實驗方法83

5．2．1大鼠SGU模型的建立83

5．2．2干預方法83

5．2．3檢測指標及方法84

5．2．4統計分析85

5．3實驗結果85

5．3．1各組大鼠胃組織肉眼形態比較85

5．3．2各組大鼠胃黏膜組織形態學比較85

5．3．3各組大鼠血清中MDA #65380;MPO #65380;GSH-Px水平比較87

5．3．4各組大鼠胃組織中MDA #65380;MPO #65380;GSH-Px水平比較88

5．3．5各組大鼠血清中炎性因子含量比較89

5．3．6各組大鼠胃組織中TLR4 #65380;MyD88 #65380;IκB-α蛋白表達比較89

5．4小結90

5．5討論90

6預針刺俞募配穴對應激性胃潰瘍模型大鼠胃組織保護作用的機制研究92

6．1實驗材料92

6．1．1實驗動物92

6．1．2動物分組及處理92

6．2實驗方法93

6．2．1束縛-水浸法應激性胃潰瘍模型制備93

6．2．2樣本采集與胃潰瘍指數測定93

6．2．3血清細胞因子測定94

6．2．4組織細胞因子測定94

6．2．5ELISA實驗評估94

6．2．6組織學觀察94

6．2．7免疫印跡實驗95

6．2．8統計分析95

6．3實驗結果95

6．3．1俞募配穴對大鼠模型胃黏膜肉眼觀及潰瘍指數變化95

6．3．2俞募配穴降低胃的UI指數情況96

6．3．3俞募配穴對模型大鼠組織形態學的影響96

6．3．4俞募配穴降低血清和胃組織中過氧化物的水平97

6．3．5俞募配穴可降低血清炎癥因子的表達99

6．3．6俞募配穴對TLR4 #65380;MyD88和NF-κBp65蛋白表達的抑制作用99

6．4小結100

6．5討論100

6．5．1研究結果100

6．5．2預針刺俞募配穴對胃黏膜的“調衡防控”機制102

第4部分腹部推拿對應激性胃潰瘍的保護作用研究

7腹部推拿對應激性胃潰瘍的保護作用研究106

7．1實驗材料106

7．1．1實驗動物及分組106

7．1．2主要儀器及試劑106

7．2實驗方法106

7．2．1實驗動物分組及干預方法106

7．2．2造模方法107

7．2．3統計分析107

7．3實驗結果107

7．3．1腹部推拿對預防SGU各組大鼠胃組織損傷有作用107

7．3．2腹部推拿預防SGU胃組織損傷可能通過調節“氧化-

抗氧化”平衡108

7．4討論111

7．4．1“經絡聯系至心腦”是腹部推拿起到“調神”作用的

前提111

7．4．2“調理臟腑”是腹部推拿起到“調神”的基礎112

7．4．3腹部推拿可通過“暢通氣機”而達到“調神”的目的112

參考文獻

附錄