《分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》分為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及原理、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)及分子生物學(xué)軟件應(yīng)用三篇。第二篇分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括DNA操作實(shí)驗(yàn)、RNA操作實(shí)驗(yàn)、蛋白質(zhì)研究相關(guān)實(shí)驗(yàn)、基因表達(dá)與調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)、轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)、細(xì)胞研究實(shí)驗(yàn)。各個(gè)實(shí)驗(yàn)章節(jié)的編排盡量按實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)器材/試劑、實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、注意事項(xiàng)和思考題統(tǒng)一格式。《分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》注重所述實(shí)驗(yàn)方法的常用性與先進(jìn)性,同時(shí)注重語(yǔ)言的簡(jiǎn)潔性與條理性,以保證實(shí)驗(yàn)方法的可操作性。
《分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》適用于高等醫(yī)藥院校基礎(chǔ)、臨床、預(yù)防和口腔醫(yī)學(xué)等專業(yè)本科生,以及生物技術(shù)、生物科學(xué)、藥學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、衛(wèi)生檢驗(yàn)和護(hù)理等專業(yè)本科生。同時(shí)可以作為生物醫(yī)學(xué)專業(yè)研究生和從事生物醫(yī)學(xué)研究的科技工作者的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)參考用書(shū)。
1865年孟德?tīng)枺∕endel)遺傳因子假說(shuō)的提出、1909年約翰遜(Johannsen)基因概念的引入、1944年艾弗里(Avery)DNA就是遺傳物質(zhì)的確定、1952年富蘭克林(Franklin)DNA晶體X線衍射圖譜的獲得,加上沃森(Watson)與克里克(Crick)天才的想象力,1953年,DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型被提出,從而開(kāi)啟了生命科學(xué)研究的又一里程碑,揭開(kāi)了分子生物學(xué)——一門從生物大分子結(jié)構(gòu)和功能水平上闡述生命現(xiàn)象及其本質(zhì)新學(xué)科的序幕。如果說(shuō)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的提出只是分子生物學(xué)的萌芽,那么1958年遺傳信息傳遞中心法則的提出、1972年DNA重組技術(shù)的建立、1983年P(guān)CR技術(shù)的發(fā)明、1998年RNA干擾現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)及技術(shù)體系的應(yīng)用、2006年誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的問(wèn)世等一系列重大理論與技術(shù)發(fā)現(xiàn),則持續(xù)催生使其蓬勃生長(zhǎng)成今天生命科學(xué)學(xué)科中的參天大樹(shù),并還在以旺盛的生命力不斷發(fā)展。
縱觀分子生物學(xué)發(fā)展歷程,理論與技術(shù)相輔相成,相互促進(jìn),如羽之雙翼、車之雙輪。今日分子生物學(xué)技術(shù)已經(jīng)滲透到生命科學(xué)領(lǐng)域的各個(gè)學(xué)科,并且已經(jīng)走進(jìn)我們每一個(gè)平常人的日常生活,如各種轉(zhuǎn)基因食品已經(jīng)擺上了我們的餐桌,就醫(yī)學(xué)而言,分子生物學(xué)技術(shù)已經(jīng)貫穿于醫(yī)學(xué)研究和臨床疾病防治的各個(gè)環(huán)節(jié)。在醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域,傳統(tǒng)的整體和細(xì)胞水平研究已全面深入到分子水平研究。這可以從諾貝爾獲獎(jiǎng)?wù)呙麊沃械玫阶C實(shí),自20世紀(jì)60年代以來(lái),諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)中約有2/3的獲獎(jiǎng)是因?yàn)樵诜肿由飳W(xué)理論與技術(shù)方面取得重要突破,或是利用分子生物學(xué)技術(shù)在某些生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域取得重要突破。這也可以從我國(guó)各類科學(xué)研究基金申請(qǐng)中得到證實(shí),歷年來(lái)生物醫(yī)學(xué)方面獲得資助的項(xiàng)目已經(jīng)很少不涉及應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)。在疾病診斷方面,以PCR技術(shù)為主的基因診斷技術(shù)在遺傳性疾病、感染性疾病和腫瘤性疾病等方面展示出廣泛的應(yīng)用前景。在疾病治療方面,目前主要以各種病毒為載體的基因治療取得了積極進(jìn)展,并將有望從根本上根除某些疾病,如糖尿病等;利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的藥用蛋白如人源性白蛋白將解決傳統(tǒng)的血液提取來(lái)源不足的瓶頸。除此之外,還有基于分子生物學(xué)技術(shù)的感染性疾病病原微生物的追蹤溯源,法醫(yī)學(xué)人體標(biāo)本的DNA檢測(cè)、親子鑒定。綜上所述,在掌握分子生物學(xué)理論的同時(shí),熟悉和掌握分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)每一個(gè)醫(yī)學(xué)生和醫(yī)學(xué)工作者而言都是非常有必要的。但必須指出的是,任何科學(xué)技術(shù)都有可能是一把雙刃劍,在我們合理應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)為人類健康帶來(lái)福音的同時(shí),也必須看到和考慮到濫用分子生物學(xué)技術(shù)的安全性問(wèn)題和可能帶來(lái)的倫理問(wèn)題。
目前國(guó)內(nèi)有關(guān)分子生物學(xué)理論的教材很多,介紹分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的也有多種,但是尚缺乏可供醫(yī)學(xué)院校本科生分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)教學(xué)的教材。我們?cè)诳偨Y(jié)長(zhǎng)期分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,參考和借鑒已有的一些實(shí)驗(yàn)技術(shù)教學(xué)內(nèi)容與方法,在既考慮本科生的水平與能力,側(cè)重實(shí)用性和可操作性的同時(shí),又考慮了分子生物學(xué)本身地發(fā)展,側(cè)重先進(jìn)性和科學(xué)性,選編了部分分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),組織編寫(xiě)了這本教材。
本教材使用對(duì)象定位于高等醫(yī)藥院校基礎(chǔ)、臨床、預(yù)防和口腔醫(yī)學(xué)等專業(yè)本科生,以及生物技術(shù)、生物科學(xué)、藥學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、衛(wèi)生檢驗(yàn)和護(hù)理等專業(yè)本科生。同時(shí)可以作為生物醫(yī)學(xué)專業(yè)研究生和從事生物醫(yī)學(xué)研究的科技工作者分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)參考用書(shū)。
本教材的44位編委來(lái)自10所高等院校和科研院所,他們大部分來(lái)自醫(yī)學(xué)院校,也有部分來(lái)自綜合性大學(xué)的生命科學(xué)學(xué)院或生物工程學(xué)院。教材的整體設(shè)計(jì)過(guò)程得到了三位副主編的鼎力相助,各位編委結(jié)合自己的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)經(jīng)驗(yàn)盡心完成每一章的編寫(xiě)工作,同時(shí)也引用了部分國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)表的文獻(xiàn)和專著內(nèi)容,以盡量提高編寫(xiě)質(zhì)量,在此謹(jǐn)對(duì)原作者表示衷心感謝。南華大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室張敏博士擔(dān)任本教材的編寫(xiě)秘書(shū)工作,為教材的最終完成做出了很大貢獻(xiàn)。本教材的編寫(xiě)得到了科學(xué)出版社、南華大學(xué)醫(yī)學(xué)部、南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院、南華大學(xué)心血管疾病研究所/動(dòng)脈硬化學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和南華大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室、南華大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中心的大力支持,在此謹(jǐn)表衷心的感謝。還有一批為本教材編寫(xiě)工作作出貢獻(xiàn)的人士在此一并表示衷心的感謝。
本教材雖然在編寫(xiě)過(guò)程中由編委分頭執(zhí)筆完成初稿后,進(jìn)行了互審,后又進(jìn)行了主編再審和編委定稿會(huì)終審,但是由于編者水平有限,加之分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速,難免存在不足之處,敬請(qǐng)使用本教材的師生和科技工作者批評(píng)指正。
劉錄山 龍石銀
2016年12月
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第一篇 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及原理
第一章 常用工具與方法
第一節(jié) 載體
第二節(jié) 常用工具酶
第三節(jié) 電泳
第二章 核酸操作技術(shù)
第一節(jié) DNA的定性和定量分析
第二節(jié) RNA的定性和定量分析
第三節(jié) DNA重組技術(shù)
第四節(jié) 核酸文庫(kù)構(gòu)建
第三章 蛋白質(zhì)研究技術(shù)
第一節(jié) 蛋白質(zhì)分離與純化
第二節(jié) 蛋白質(zhì)定量
第三節(jié) 蛋白質(zhì)免疫印跡
第四節(jié) 流式細(xì)胞分析技術(shù)
第五節(jié) 免疫共沉淀
第四章 基因功能研究相關(guān)技術(shù)
第一節(jié) 基因表達(dá)與調(diào)節(jié)
第二節(jié) 轉(zhuǎn)基因技術(shù)
第三節(jié) 基因敲除
第四節(jié) 基因沉默
第五章 細(xì)胞研究技術(shù)
第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)
第二節(jié) 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
第二篇 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
第六章 DNA操作實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)一 質(zhì)粒DNA的微量快速提取
實(shí)驗(yàn)二 外周血白細(xì)胞DNA的微量快速提取(離心柱法)
實(shí)驗(yàn)三 質(zhì)粒DNA的酶切與鑒定
實(shí)驗(yàn)四 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)
實(shí)驗(yàn)五 DNA序列測(cè)定(雙脫氧測(cè)序銀染法)
實(shí)驗(yàn)六 DNA印跡雜交技術(shù)(Southern印跡法)
實(shí)驗(yàn)七 DNA重組與鑒定
實(shí)驗(yàn)八 克隆化DNA的定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)
第七章 RNA操作實(shí)驗(yàn)
第八章 蛋白質(zhì)研究相關(guān)實(shí)驗(yàn)
第九章 基因表達(dá)與調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)
第十章 轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)
第十一章 細(xì)胞研究實(shí)驗(yàn)
第三篇 分子生物學(xué)軟件應(yīng)用
第十二章 PCR引物設(shè)計(jì)及相關(guān)軟件使用
第十三章 核酸序列分析與預(yù)測(cè)
第十四章 蛋白質(zhì)序列分析與結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
第十五章 科研論文中的圖片處理
第十六章 EndNote軟件的安裝及其工醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)管理和科研寫(xiě)作中的應(yīng)用
參考文獻(xiàn)
附錄
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