前言
概述 1
一、生物化學與分子生物學實驗課的性質(zhì)、任務與目的 1
二、生物化學與分子生物學實驗室安全與規(guī)則 1
三、實驗報告書寫 2
第一章 基本實驗操作與常用技術(shù)及儀器的使用 3
第一節(jié) 基本實驗操作 3
一、玻璃器皿的洗滌與干燥 3
二、移液器的使用 4
三、液體的混勻 6
四、沉淀的分離 6
五、常用生物材料的處理 7
第二節(jié) 常用技術(shù)及儀器的使用 9
一、離心技術(shù)與離心機 9
二、分光光度分析技術(shù)與分光光度計及酶標儀 10
三、電泳技術(shù)與電泳儀 12
四、層析技術(shù)與層析柱 16
五、體外DNA擴增技術(shù)與PCR儀 20
第二章 經(jīng)典驗證性實驗 26
實驗一 蛋白質(zhì)的鹽析作用 26
實驗二 乳酸脫氫酶及其輔酶Ⅰ的作用 27
實驗三 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的測定 29
實驗四 血糖濃度測定 32
一、Folin-吳氏法 32
二、葡萄糖氧化酶偶聯(lián)法（GOD-POD法） 34
實驗五 胰島素及腎上腺素對血糖濃度的影響 36
實驗六 運動對尿中乳酸含量的影響 37
實驗七 酮體的生成和利用 39
實驗八 膽固醇提取定性 40
實驗九 血清總膽固醇的測定 42
一、醋酐-硫酸單一試劑顯色法測定總膽固醇 42
二、氧化酶法測定血清總膽固醇 43
第三章 綜合性實驗 45
實驗十 蛋白質(zhì)含量的測定 45
一、紫外分光測定法 45
二、Lowry法測定蛋白質(zhì)含量 46
三、考馬斯亮藍法 48
實驗十一 血清LDH同工酶譜分析 49
一、乙酸纖維素薄膜電泳法 50
二、瓊脂糖凝膠電泳法 52
實驗十二 堿性磷酸酶Km值的測定 55
實驗十三 堿性磷酸酶分離純化及比活性的測定 57
一、堿性磷酸酶的提取分離和純化 58
二、堿性磷酸酶比活性的測定 60
實驗十四 DNA瓊脂糖凝膠電泳 63
實驗十五 聚合酶鏈式反應技術(shù)（PCR）體外擴增DNA 64
實驗十六 質(zhì)粒DNA的制備（堿變性法） 66
實驗十七 血清蛋白質(zhì)的電泳分離 69
一、血清蛋白質(zhì)乙酸纖維素薄膜電泳 69
二、聚丙烯酰胺凝膠電泳（圓盤電泳） 71
實驗十八 SDS-PAGE電泳測定蛋白質(zhì)的相對分子量 75
實驗十九 蛋白質(zhì)印跡 79
第四章 研究性實驗 82
實驗二十 凝膠過濾層析法分離純化脲酶 82
實驗二十一 離子交換層析法分離血清蛋白質(zhì) 86
實驗二十二 RT-PCR技術(shù) 87
一、總RNA的提取 87
二、RT-PCR 89
實驗二十三 真核生物基因組DNA的提取與鑒定 90
實驗二十四 基因克隆及蛋白原核表達 92
第五章 創(chuàng)新性實驗 96
實驗二十五食管癌PAX9基因的克隆及重組載體構(gòu)建 96
實驗二十六 支架蛋白RACK1小干擾RNA抑制卵巢癌細胞CAOV3的增殖、遷移和侵襲 102
附錄 106
附錄1 常用溶液的配制 106
附錄2 常用培養(yǎng)基的配制 111
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